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醫用手術包常用的消毒方式有以下兩種：
(一)蒸汽消毒：醫用手術包放在高壓蒸汽滅菌器內，溫度120℃，2個大氣壓下，用飽和蒸汽消毒持續1小時即可。若無高壓滅菌設備，用普通蒸籠代替。將醫用手術包放在籠內，蓋嚴密，水沸后持續2小時即可。為了驗證是否達到滅菌要求，甩少許硫磺或明礬粉，裝在小瓶內包在包內，消毒后，硫磺化水結晶或明礬粉化為乳白色液者為達到滅菌要求。
消毒后的醫用手術包，放在灶旁或日光下干燥之后備用。手術時將大包放在器械臺上打開，將小包內鈍性器械放上去，再將消毒液內器械撈出來，生理鹽水沖洗，擦干后也放上去，排列整齊。
(二)煮沸消毒：這是金屬器械、玻璃類器械、絲線等常用的消毒方法。自內障小醫用手術包內的器械也可用此法消毒，尤其連續要作幾個手術，鈍性器械數量有限，事前不能分成數個小包蒸汽消毒，可臨時煮沸消毒。將器械上油脂或血跡擦洗干凈，放在消毒鍋內，浸沒在水中，加溫煮沸10～15分鐘即可。手術中急用的1—2個器械煮沸5分鐘就可以用。若器械受過污染最好煮沸1個小時以上。若在沸水中加碳酸氫鈉使成2％堿性溶液，可提高水的沸點達105℃，加大細菌致死率，并有保護金屬器械防止生銹的作用。煮沸消毒后的器械應立即取出，不宜久留水中，以免生銹。煮沸時間從水沸騰后開始計算。高原地區氣壓低，沸點低，應按海拔高度計算，每增高300米，延長滅菌時間2分鐘。
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